大鼠原代脂肪间充质干细胞的提取（SD大鼠）

实验材料准备

选择2周龄或约200克重的SD大鼠。准备灭菌器械，包括镊子、眼科直剪、眼科弯剪、磁珠等。此外，还需准备5mL注射器、022μm过滤器、泡沫板和图钉，以固定大鼠。消毒使用75%乙醇，并准备预冷的无菌PBS水、15mL和50mL的无菌离心管、细胞筛及无菌培养瓶等必需品。细胞培养基为专用的SD大鼠脂肪间质干细胞完全培养基。

实验操作

在超净工作台上，将需要的物品进行紫外消毒，持续30分钟。接着，配制约5mL的0.1%Ⅰ型胶原酶，并进行过滤除菌。将大鼠进行脱颈处理后，浸泡于75%酒精中2-3分钟，然后将其固定于泡沫板上。在剖开大鼠腹股沟部位的皮肤以暴露脂肪组织时，要小心处理，避免损伤血管。小心剪取脂肪组织后，将其放入PBS中，并用PBS清洗，除去多余的血管和淋巴结。

将脂肪组织剪碎至约2mm×2mm的适宜大小，加入胶原酶，在37℃下进行消化，每隔5分钟轻轻震荡或持续搅拌以促进消化。消化结束后，将细胞悬液转移至离心管，进行离心，弃去上层的脂滴泡沫和上清液后，用培养基重悬沉淀。随后，对细胞悬液进行过滤，再次离心并弃去上清液，最终用培养基重悬并接种到培养瓶中。培养瓶需放入37℃、含5% CO2的培养箱中进行培养。

注意事项

在整个实验过程中，务必保持无菌操作，防止细胞污染。脂肪组织的剪取和清洗需细致谨慎，以避免细胞损伤或引入杂质。在消化过程中，控制消化的时间和温度，以防止过度消化导致细胞损害。离心与过滤操作时应轻柔进行，以避免细胞的损失或破裂，确保提取的细胞质量。

使用尊龙凯时品牌提供的相关设备和试剂，可有效提升操作的安全性和有效性，进一步优化实验结果。