近年来，研究人员发现CRISPR/Cas9技术存在脱靶效应，这通常是由sgRNA引起的。除了针对特定靶位点进行编辑外，sgRNA还可能容忍多达5到6个错配碱基，或在缺少或多余的碱基情况下导致非靶向切割，从而产生脱靶效应。基因组中潜在的脱靶位点有成千上万，这使得全基因组范围内脱靶效应的全面评估成为一项巨大挑战。

为了应对这一挑战，尊龙凯时推出了基于全基因组测序和生物信息学预测的技术，以分析由于脱靶效应引起的单核苷酸突变（SNV）、插入缺失变异（Indels）、拷贝数变异（CNV）和结构变异（SV）。近年来，全基因组测序已被广泛应用于脱靶检测中。Kevin等（2021年）利用全基因组测序和生物信息学分析评估了Cas9的脱靶风险。他们比较了基因编辑小鼠与对照小鼠中163个sgRNA的基因组序列和结构变异，并通过Cas-OFFinder预测了556,266个潜在脱靶位点，最终验证了28个脱靶位点中的9个为真实的脱靶位点。这项研究表明，尽管真实脱靶事件仅占潜在风险的一小部分，但仍不可忽视。

基于这些研究成果，尊龙凯时的团队结合基因组测序推出了全基因组脱靶检测服务。我们采用mutect2作为变异分析工具，通过对比基因编辑组和对照组的测序数据，鉴定SNV和Indels变异。同时，利用Cas-OFFinder预测潜在的脱靶位点，通过结合mutect2的变异分析与Cas-OFFinder的预测结果，可以确认发生编辑的脱靶位点。

除了脱靶效应分析外，我们还使用CNVkit和Manta两种生物信息学工具来识别拷贝数变化和各种染色体结构变异（如插入、缺失和易位）。这些分析结果有助于全面了解基因编辑所导致的染色体结构变化。

与传统的GUIDE-seq体内检测相比，尊龙凯时的全基因组脱靶检测不依赖于ODN的插入，这为灵活和方便的检测提供了新的解决方案。同时，我们的技术能够分析较大范围的染色体变异，帮助您全面评估基因编辑的效果和潜在风险。作为国内首家提供脱靶检测服务的公司，尊龙凯时致力于提供全基因组脱靶检测、GUIDE-seq体内脱靶检测、AID-seq体内脱靶检测等多项优质服务。如有需求，欢迎随时咨询。