尊龙凯时提供的RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞培养说明书如下：

一、细胞培养条件

细胞名称： RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞

生长特性： 贴壁生长

冻存条件： 使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系： DMEM/F-12 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法： 第一次建议按1:2进行传代

传代情况： 每2天更换一次培养基

备注： 使用无菌离心管收集培养基，以便于进行对比培养，如果对比培养效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

待细胞培养至良好状态后，将瓶内灌满完全培养液并封好瓶口，是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内严格进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并记录不同倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片将作为售后服务的重要依据。若未提供照片，默认细胞状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶则使用自制完全培养基，以便于对比。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代：

当细胞未超过80%汇合度时，收集瓶内完全培养液至离心管，留下5ml培养基，置于37℃、5% CO2孵箱内培养；若细胞密度超过80%，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加1-2ml消化液（0.25% 胰蛋白酶- 0.53mM EDTA）至培养瓶中，置于37℃培养箱消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态，若细胞大多数变圆并脱落，则迅速拿回操作台，轻敲几下后加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，并补加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2的比例分瓶传代（即两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存：

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1ml，观察细胞状态，待细胞回缩呈圆形后加入5ml完全培养液终止消化。轻轻吹打使细胞脱落，然后转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱；若需转移至液氮罐，需在-80℃冰箱中存放至少24小时后再进行转移。

c、细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，在1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，使用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能在运输过程中因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。可用以下方法处理：将所有培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清作对比培养；沉淀中加入1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再进行离心、弃上清，重悬于1-2ml完全培养基。按1:2比例分瓶传代（两个T25），并补充新培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发情况：

细胞运输过程中遭遇丢失、瓶身破损、培养液漏液等问题，可以重发；如细胞在收到后48小时内出现污染，并提供真实实验结果，可重发；常温发货的细胞在静置24小时后、干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内，若未存活（需提供细胞状态照片），则可重发；如出现污染，需在规定时间内联系，核实后可重发；细胞活性问题，需在收货7天内提供真实实验结果，且需用台盼蓝染色法鉴定，审核后重发。收到细胞当天及第2、3天拍照以便后期核实，超过3天未告知的视为合格产品。

2）不予以重发的情况：

客户自身造成的污染、错误操作导致细胞状态不佳以及未采用尊龙凯时推荐的培养体系等情况将不予重发。若在收到细胞后2天内未告知任何问题，或在细胞培养过程中进行其他处理等情况，也将不予重发；具体情况将依赖于实际情况进行评估。